氨基柱,全稱(chēng)氨丙基鍵合硅膠色譜柱,色譜柱家族中較靈活的色譜柱,不僅可以用于正反相還可以應(yīng)用于離子交換(弱陰離子交換柱)中。但是需要注意的是,氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)更容易水解,所以要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)(建議水比例不超過(guò)40%)。所以,在使用后以及準(zhǔn)備長(zhǎng)時(shí)間放置該柱時(shí),必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。
氨基柱的活化:
對(duì)于新氨基柱,首先應(yīng)詳細(xì)閱讀使用說(shuō)明書(shū),了解柱子出廠(chǎng)保存溶劑。一般出廠(chǎng)會(huì)保存在正相溶劑中,如果保存溶劑與將要使用的流動(dòng)相極性不同不互溶,先用異丙醇過(guò)渡。過(guò)渡過(guò)程中應(yīng)注意異丙醇粘度較大,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,應(yīng)使用小流速過(guò)渡。
當(dāng)使用反相模式時(shí),用前請(qǐng)使用異丙醇小流速過(guò)夜平衡色譜柱。流速建議0.1-0.2mL/min,之后再轉(zhuǎn)換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉(zhuǎn)換到和流動(dòng)相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。
當(dāng)使用正相模式時(shí),如與出廠(chǎng)保存溶劑互溶,可使用流動(dòng)相直接沖洗20倍柱體積;如不互溶請(qǐng)用異丙醇過(guò)渡。
注意事項(xiàng):
正相條件:正相使用時(shí),不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析
反相條件:pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),所以要嚴(yán)格控制pH范圍,使其pH范圍在2.0~8.0,通常建議使用范圍:pH3.0~7.0比較合適;
流動(dòng)相中水相比例越高越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),所以應(yīng)盡量減少水在氨基柱上的保留,建議水相使用比例
短時(shí)間內(nèi),氨基柱可保存在純甲醇,乙腈或異丙醇中,若長(zhǎng)時(shí)間不使用建議保存在異丙醇和正己烷試劑 中封存。